Nồi hấp tiệt trùng là thiết bị không thể thiếu trong các phòng thí nghiệm và cơ sở sản xuất. Tùy thuộc vào công suất, chúng có nhiều loại khác nhau, từ di động, đứng cho đến nằm ngang. Dù được sử dụng rộng rãi, nhiều người vẫn tin tưởng tuyệt đối vào việc kiểm định định kỳ, mà không nhận ra rằng kiểm định chỉ đánh giá các thông số vật lý của thiết bị. Thực tế, nhiệt độ hiển thị trên màn hình có thể không phải là nhiệt độ thực tế của vật phẩm, dẫn đến việc tiệt trùng không hoàn toàn và làm ảnh hưởng đến kết quả thí nghiệm.
Vì vậy, việc xác minh hiệu quả tiệt trùng là cực kỳ quan trọng. Dưới đây là cách thực hiện chi tiết.
I. Chuẩn bị vật liệu thử nghiệm
Để kiểm tra chính xác, bạn cần chuẩn bị các vật liệu sau:
- Đĩa giấy Bacillus stearothermophilus: Đây là vi khuẩn chỉ thị sinh học thường dùng, với số lượng bào tử khoảng CFU/lát.
- Thẻ chỉ thị hóa học: Loại thẻ này sẽ đổi màu khi tiếp xúc với hơi nước áp suất 121°C.
- Môi trường nuôi cấy: Sử dụng môi trường bromocresol-pepton tím, đã được tiệt trùng sơ bộ ở 116°C trong 20 phút.
- Nhiệt kế điểm: Nhiệt kế có thang đo từ 0-150°C.
II. Phương pháp thử nghiệm chi tiết
Thực hiện thử nghiệm theo các bước sau để đảm bảo kết quả chính xác:
- Sắp xếp mẫu:
- Dùng nhíp vô trùng, đặt đĩa giấy vi khuẩn vào ống nghiệm đã đậy kín.
- Đặt thẻ chỉ thị hóa học và nhiệt kế điểm vào các ống nghiệm riêng biệt.
- Chuẩn bị từ 5 đến 10 ống nghiệm cho mỗi loại. Sắp xếp chúng ở nhiều vị trí khác nhau trong nồi hấp, chẳng hạn như ở cửa thoát hơi, cửa xả đáy, hoặc ở năm vị trí khác nhau ở giữa. Nếu nồi hấp có nhiều tầng, hãy đặt mẫu ở mỗi tầng.
- Kiểm tra và hiệu chuẩn nhiệt kế:
- Trước khi sử dụng, nhiệt kế điểm phải được hiệu chuẩn. Lắc cột thủy ngân xuống dưới 40°C.
- Trong quá trình tiệt trùng, sự chênh lệch nhiệt độ không quá 1°C giữa các lần đo cho thấy nhiệt độ được phân bổ đồng đều.
- Thực hiện tiệt trùng và đánh giá:
- Sau khi quá trình tiệt trùng kết thúc, đặt đĩa vi khuẩn vào môi trường nuôi cấy bromocresol-pepton tím đã được tiệt trùng sơ bộ.
- Ủ mẫu ở 56-60°C trong 24-48 giờ và quan sát sự đổi màu:
- Màu vàng: Nếu môi trường nuôi cấy chuyển sang màu vàng, điều này cho thấy bào tử Bacillus stearothermophilus chưa bị tiêu diệt hoàn toàn. Vi khuẩn vẫn có thể phát triển, phân hủy glucose và tạo ra axit, làm môi trường chuyển màu.
- Màu tím: Nếu môi trường nuôi cấy giữ nguyên màu tím, điều đó chứng tỏ các bào tử đã bị tiêu diệt hoàn toàn.
- Thiết lập các nhóm đối chứng:
- Đối chứng dương tính: Đặt một đĩa giấy vi khuẩn chưa tiệt trùng vào môi trường nuôi cấy để xác nhận khả năng phát triển của vi khuẩn.
- Đối chứng âm tính: Sử dụng một ống nghiệm chỉ chứa môi trường nuôi cấy, không có đĩa vi khuẩn, để kiểm tra tính vô trùng của môi trường.
- Kiểm tra thẻ chỉ thị hóa học:
- Trong quá trình tiệt trùng, khối màu trên thẻ chỉ thị sẽ chuyển từ vàng nhạt sang đen.
- So sánh độ đậm của màu sau khi tiệt trùng với màu đối chứng để xác định hiệu quả. Lưu ý: Thẻ phải được bảo quản ở nơi khô ráo, tránh ẩm ướt để không bị đổi màu trước khi sử dụng.
Kết quả cuối cùng
Để khẳng định nồi hấp tiệt trùng đạt yêu cầu, bạn cần thực hiện thử nghiệm sáu lần, bao gồm ba lần kiểm tra sự phân bổ nhiệt khi không tải và ba lần kiểm tra độ xuyên thấu nhiệt khi đầy tải (không quá 2/3 tổng thể tích).
Trong cả sáu lần kiểm tra tại năm điểm khác nhau, các kết quả phải đồng nhất:
- Nhiệt độ luôn ở mức 121°C.
- Thẻ chỉ thị hóa học chuyển sang màu đen phù hợp.
- Môi trường nuôi cấy không đổi màu.
Nếu tất cả các tiêu chí trên đều được đáp ứng, bạn có thể tin tưởng rằng nồi hấp của mình đang hoạt động hiệu quả.
Xem thêm: Để khử trùng hiệu quả, nồi hấp phải loại trừ hoàn toàn không khí lạnh
